Tide Fluor和Tide Quencher染料選擇指南
今天百螢總結(jié)了AAT Bioquest研發(fā)的Tide Fluor和Tide Quencher兩類染料的特點(diǎn)、使用方法等，希望可以為還不知道如何選擇這兩類產(chǎn)品的小伙伴一些幫助。
什么是Tide Fluor、Tide Quencher染料?
Tide Fluor和Tide Quencher是一類磷酰胺染料和CPG載體，用于制備FRET寡核苷酸，它們是經(jīng)典染料（如FAM、HEX、TET和JOE）和上等低聚標(biāo)記染料的**替代品。AAT Bioquest的Tide Fluor 染料（如TF1，TF2，TF3，TF4，TF5，TF6，TF7和TF8）具有比典型的熒光團(tuán)（如熒光素，羅丹明和花青素）更強(qiáng)的熒光性和更高的光穩(wěn)定性。我們的TF2的激發(fā)和發(fā)射波長與羧基熒光素（FAM）的激發(fā)波長和發(fā)射波長基本相同，這使其易于用于熒光素的生物學(xué)應(yīng)用，但TF2具有更強(qiáng)的性能。與FAM探針相比，TF2在生理?xiàng)l件下具有更強(qiáng)的熒光，并且光穩(wěn)定性更高。相比熒光素和Cy染料（如AlexaFluor® 和Cy3，Cy5和Cy7），Tide Fluor 染料具有更高的成本效益。
圖1.雜交誘導(dǎo)的分子信標(biāo)寡核苷酸探針的熒光增強(qiáng)對比，該探針包含Tide Fluor 染料作為供體或Tide Quencher 染料作為受體。
除了杰出的Tide Fluor 供體染料外，Tide Quencher FRET受體染料（例如TQ1，TQ2，TQ3，TQ4，TQ5，TQ6和TQ7）經(jīng)過優(yōu)化，可與我們的Tide Fluor 染料和經(jīng)典的熒光團(tuán)（例如AMCA，EDANS，F(xiàn)AM，TAMRA，HEX，JOE，TET，ROX，Cy3，Cy5和Cy7）配對。與我們的Tide Fluor 供體染料一樣，我們的Tide Quencher 受體染料與市場上其他同類產(chǎn)品相比，也具有更高的成本效益，可滿足您所需的生物學(xué)應(yīng)用。
為了方便研究，Tide Fluor 染料和Tide Quencher 染料擁有多種反應(yīng)形式。對于寡核苷酸的合成標(biāo)記，我們同時(shí)提供了Tide Fluor 和Tide Quencher 染料的亞磷酰胺及其CPG載體。對于寡核苷酸的后標(biāo)記，我們提供氨基反應(yīng)性和巰基反應(yīng)性的Tide Fluor 和Tide Quencher 水溶性染料。
Tide Fluor與Tide Quencher特點(diǎn)
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Tide Fluor染料
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Tide Quencher染料
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經(jīng)過優(yōu)化，可與Tide Quencher 受體配對使用，以*大程度提高FRET電位
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較強(qiáng)的熒光強(qiáng)度可以增強(qiáng)檢測靈敏度
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對pH不敏感和對環(huán)境不敏感的熒光，使檢測更加方便簡單
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更高的光穩(wěn)定性，可提高熒光成像的質(zhì)量
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多種反應(yīng)形式可用于綴合物
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功能強(qiáng)大：能夠探索其他淬滅劑可能無法達(dá)到的FRET電位。
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多種反應(yīng)形式：方便自我構(gòu)建所需的FRET生物分子
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匹配度高：與您所需的熒光供體完全匹配。
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性價(jià)比高：具有*佳的性能與便宜的價(jià)格。
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Tide Fluor與Tide Quencher系列產(chǎn)品選擇指南
表1.Tide Fluor系列產(chǎn)品選擇指南
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Tide Fluor 染料
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Ex(nm)
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Em(nm)
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主要應(yīng)用功能*
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Tide Fluor 1（TF1）
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341
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447
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TF1被設(shè)計(jì)為EDANS熒光團(tuán)的優(yōu)良替代品，具有以下特征：
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吸收更強(qiáng)
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更高的熒光強(qiáng)度
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對環(huán)境敏感的熒光較少
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Tide Fluor 2（TF2）
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499
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522
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TF2被設(shè)計(jì)為熒光素（FAM和FITC）的優(yōu)良替代品，具有以下特征：
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在pH7時(shí)熒光強(qiáng)度更強(qiáng)
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對pH敏感的熒光更少
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光穩(wěn)定性更高
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Tide Fluor 3（TF3）
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560
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580
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TF3被設(shè)計(jì)為Cy3熒光團(tuán)的優(yōu)良替代品，具有以下特征：
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較強(qiáng)的熒光強(qiáng)度
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光穩(wěn)定性更高
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Tide Fluor 4（TF4）
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588
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610
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TF4被設(shè)計(jì)為ROX和Texas Red熒光團(tuán)的優(yōu)良替代品，其具有以下特征：
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較強(qiáng)的熒光強(qiáng)度
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共軛產(chǎn)量更高
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更長的保質(zhì)期
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Tide Fluor 5（TF5）
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649
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664
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TF5被設(shè)計(jì)為Cy5熒光團(tuán)的優(yōu)良替代品，具有以下功能：
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較強(qiáng)的熒光強(qiáng)度
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光穩(wěn)定性更高
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Tide Fluor 6（TF6）
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676
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695
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TF6被設(shè)計(jì)為Cy5.5熒光團(tuán)的優(yōu)良替代品，具有以下功能：
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較強(qiáng)的熒光強(qiáng)度
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光穩(wěn)定性更高
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Tide Fluor 7 (TF7)
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749
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775
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TF7被設(shè)計(jì)為Cy7熒光團(tuán)的優(yōu)良替代品，具有以下功能：
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較強(qiáng)的熒光強(qiáng)度
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光穩(wěn)定性更高
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Tide Fluor 8 (TF8)
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775
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807
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TF8是AAT Bioquest目前提供的*長波長的Tide Fluor 染料。其綴合物可用于基于NIR熒光探針的體內(nèi)成像分析。
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表2.Tide Quencher系列產(chǎn)品選擇指南
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Tide Quencher染料
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吸收(nm)
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主要應(yīng)用功能*
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Tide Quencher 1（TQ1）
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?490
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TQ1被設(shè)計(jì)為DABCYL優(yōu)良淬滅劑的替代品，具有以下特征：
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吸收更強(qiáng)
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更高的淬滅效率
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具有所需溶解度的多功能反應(yīng)形式
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Tide Quencher 2（TQ2）
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~520
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TQ2被設(shè)計(jì)為FAM，HEX，TET，JOE，TF2和羅丹明6G的優(yōu)良淬滅劑，具有以下特征：
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吸收更強(qiáng)
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更高的淬滅效率
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具有所需溶解度的多種反應(yīng)形式
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Tide Quencher 3 (TQ3)
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~570
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TQ3被設(shè)計(jì)為TAMRA，TF3和Cy3的優(yōu)良淬滅劑，具有以下特征：
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吸收更強(qiáng)
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更高的淬火效率
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具有所需溶解度的多種反應(yīng)形式
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Tide Quencher 4 (TQ4)
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?600
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TQ4被設(shè)計(jì)為ROX、TF和Texas Red的優(yōu)良淬滅劑，具有以下特點(diǎn)：
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吸收更強(qiáng)
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更高的淬滅效率
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具有所需溶解度的多種反應(yīng)形式
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Tide Quencher 5(TQ5)
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~660
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TQ5被設(shè)計(jì)為Cy5和TF5的優(yōu)良淬滅劑，具有以下特征：
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吸收更強(qiáng)
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更高的淬火效率
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具有所需溶解度的多種反應(yīng)形式
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Tide Quencher 6 (TQ6)
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~700
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TQ6被設(shè)計(jì)為Cy5.5和TF6的優(yōu)良淬滅劑，具有以下功能：
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吸收更強(qiáng)
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更高的淬滅效率
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具有所需溶解度的多種反應(yīng)形式
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Tide Quencher 7（TQ7）
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~760
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TQ7被設(shè)計(jì)為Cy7和TF7的優(yōu)良淬滅劑，具有以下功能：
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吸收更強(qiáng)
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更高的淬火效率
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具有所需溶解度的多種反應(yīng)形式
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選擇FRET的供體和受體
供體分子和受體分子的選擇可以相同，也可以不同。在大多數(shù)應(yīng)用中，它們是不同的染料。FRET既可以通過受體敏化熒光的出現(xiàn)，也可以通過供體/受體的強(qiáng)度比變化（如果受體是熒光的）或供體熒光強(qiáng)度的降低來檢測。在后一種情況下，受體可以是熒光的或非熒光的。各種D/A對的Ro值可以明確的看出FRET的效率，F(xiàn)RET對的Ro值越大，F(xiàn)RET效率越高。熒光素/四甲基羅丹明對已被廣泛地用于開發(fā)FRET的分析。EDANS/DABCYL對已被廣泛用于開發(fā)FRET的核酸探針和蛋白酶底物。MCA（7-甲氧基香豆素-4-乙酸）和DNP（2，4-二硝基苯胺）是開發(fā)熒光探針的另一對供體/受體。與EDANS/DABCYL對相比，MCA/DNP對的熒光信號波長通常較短且較弱。然而，由于波長較小，MCA/DNP對往往表現(xiàn)出更好的親和力。DNP也是一種很好的FRET受體，與色氨酸（Trp）、2-氨基苯甲酸（Abz）或Abz衍生物（如Abz（N-Me））配對。
表3.一些D/A對的Ro值
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供體
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受體
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Ro(?)
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熒光素 Fluorescein
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四甲基羅丹明 Tetramethylrhodamine
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49-56
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IAEDANS
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FITC
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49
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IAEDANS
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5-（碘乙酰胺基）熒光素 5-(Iodoacetamido)fluorescein
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49
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熒光素 Fluorescein
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熒光素 Fluorescein
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44
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EDANS
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DABCYL
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33
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色氨酸 Tryptophan
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IAEDANS
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22
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色氨酸 Tryptophan
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磺酰 Dansyl
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21-24
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色氨酸 Tryptophan
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Pyrene
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28
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磺酰 Dansyl
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熒光素 Fluorescein
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33-41
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奈 Naphthalene
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磺酰 Dansyl
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22
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芘 Pyrene
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香豆素 Coumarin
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39
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B-藻紅蛋白 B-Phycoerythrin
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Cy5
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79
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表4.Tide Quencher 染料FRET應(yīng)用推薦
注.建議使用綠色標(biāo)記的FRET對，用青色標(biāo)記的對可以使用，但效率不如綠色對標(biāo)記。我們已經(jīng)驗(yàn)證，這些推薦的FRET對在我們的蛋白酶和核酸檢測分析中已表現(xiàn)出高靈敏度和低背景。除FRET效率外，還需要考慮其他因素，例如pH，多路復(fù)用和緩沖液干擾等。
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