(一)**熒光標記常用的熒光染料
FITC(異硫氰酸熒光素):綠色530nm
PE(藻紅蛋白):橙黃色575nm
PerCP(多甲藻黃素葉綠素蛋白):深紅色675nm
PI(碘化丙啶):橙紅色620nm
488nm波長的氬離子激光激發(fā)
APC(別藻青蛋白):紅色660nm
630nm波長的氦氖激光或紅色二極管激光激發(fā)
Cy3:激發(fā)波長488nm,*大發(fā)射波長570nm。1)其標記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細胞儀;2)FL2通道檢測;3)為小分子染料,非常適合需小分子染料的流式細胞術,熒光強度低于PE。
Cy5:激發(fā)波長633/635nm,*大發(fā)射波長670nm。1)其標記的抗體適用于所有配備633nm氬離子激光器的流式細胞儀;2)FL4通道檢測;3)小分子染料,非常適合需小分子染料的流式細胞術,熒光強度低于APC。4)與單核和粒細胞非特異性結合多,易出現(xiàn)假陽性結果。
(二)**熒光標記
常用的標記染色為直接**熒光染色和間接**熒光染色。在進行雙參數(shù)或多參數(shù)分析時,常常需要進行熒光抗體的組合標記,目前已經(jīng)有雙色、三色以及四色標記。
(三)細胞自發(fā)熒光
自發(fā)熒光信號為噪聲信號,在多數(shù)情況下會干擾對特異熒光信號的分辨和測量。在**細胞化學等測量中,對于結合水平不高的熒光抗體來說,如何提高信噪比是個關鍵。一般說來,細胞成分中能夠產(chǎn)生自發(fā)熒光的分子(例如核黃素、細胞色素等)的含量越高,自發(fā)熒光越強;培養(yǎng)細胞中死細胞/活細胞比例越高,自發(fā)熒光越強;細胞樣品中所含亮細胞的比例越高,自發(fā)熒光越強。
熒光染料在吸收紫外線或可見光后,能把短波長的光轉變?yōu)椴ㄩL較長的可見光波而反射出來,呈閃亮的鮮艷色彩。泛指吸收某一波長的光波后能發(fā)射出另一波長大于吸收光的光波的物質(zhì)。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合.