根據(jù)樣本數(shù)量,用線粒體染色試劑盒將BBcellProbeTM M16熒光染料100倍稀釋,再用相應(yīng)的培養(yǎng)基或者HBSS緩沖液20-400倍稀釋(對于后續(xù)需要做固定或透化的樣本,20-100倍稀釋),配制成染色工作液。 【注】:
也可以直接用相應(yīng)的培養(yǎng)基或HBSS等緩沖液稀釋M16染料母液至所需濃度。
建議收到產(chǎn)品后,根據(jù)單次使用量,對母液進(jìn)行小量分裝,每次使用一管,試劑-20℃避光凍存,一年穩(wěn)定。
開始實(shí)驗(yàn)前,使用培養(yǎng)基或HBSS緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。工作濃度為根據(jù)不同細(xì)胞的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定的zui佳工作濃度,一般染色終濃度2000-40000倍稀釋。
為了降低過度加載染料導(dǎo)致的潛在背景和線粒體毒性,在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的前提下應(yīng)盡可能低濃度染色。另外,濃度過高也可能造成非特異性染色,對其他細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行染色。
工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
為了降低探針加載過度可能引起的假陽性,建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。
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