今天百螢為大家介紹一個(gè)非常實(shí)用的小技巧，用于確定熒光分子的亮度。如果你想選購一種熒光探針，而你已經(jīng)確切的了解到了幾種探針均可以滿足你的實(shí)驗(yàn)要求，但是，哪一個(gè)才是熒光強(qiáng)度好的呢？求人不如求己，實(shí)驗(yàn)還得靠自己！今天小螢告訴你之后，請收藏好它！
熒光分子的亮度取決于兩個(gè)因素：
1. 消光系數(shù)（ε):熒光分子吸收特定波長的光的強(qiáng)度。
2. 熒光量子產(chǎn)率（Φ）:吸收光轉(zhuǎn)換為發(fā)射光的效率。
有小伙伴要問了，知道了消光系數(shù)和熒光量子產(chǎn)率又該怎么辦呢？請記住以下公式：
亮度=消光系數(shù)（ε） x 熒光量子產(chǎn)率（Φ）
實(shí)例驗(yàn)證:大家對于PE、APC、Cy5應(yīng)該都是比較熟悉的。
· PE = 1,960,000 cm-1M-1 （ε)x 0.84（Φ） = 1646400
· APC = 700,000 cm-1M-1 （ε)x 0.68 （Φ）= 476000
· Cy5 = 250,000 cm-1M-1 （ε)x 0.20 （Φ）= 50000
現(xiàn)在相信大家不用我說，也能看出哪個(gè)更亮了吧！那有小伙伴又要問了，可是熒光探針那么多，我找不到確切的消光系數(shù)和熒光量子產(chǎn)量?。e著急，下面是我們?yōu)槟偨Y(jié)好的常用的產(chǎn)品消光系數(shù)和熒光量子產(chǎn)率請收好！
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產(chǎn)品名稱
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消光系數(shù)（ε）cm-1M-1
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熒光量子產(chǎn)率（Φ）
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備注
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iFluor 350
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20000
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0.95
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在水性緩沖液中（pH=7.2）
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iFluor 405
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37000
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0.91
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iFluor 430
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40000
|
0.78
|
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iFluor 450
|
40000
|
0.82
|
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iFluor 488
|
75000
|
0.9
|
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iFluor 514
|
80000
|
0.83
|
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iFluor 532
|
90000
|
0.68
|
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iFluor 546
|
100000
|
0.67
|
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iFluor 555
|
100000
|
0.64
|
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iFluor 560
|
120000
|
0.57
|
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iFluor 568
|
100000
|
0.57
|
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iFluor 594
|
180000
|
0.53
|
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iFluor 610
|
110000
|
0.85
|
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iFluor 633
|
250000
|
0.29
|
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iFluor 647
|
250000
|
0.25
|
|
iFluor 660
|
250000
|
0.26
|
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iFluor 670
|
250000
|
0.63
|
|
iFluor 680
|
220000
|
0.23
|
|
iFluor 700
|
220000
|
0.23
|
|
iFluor 750
|
275000
|
0.12
|
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iFluor 790
|
250000
|
0.13
|
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iFluor 800
|
250000
|
0.11
|
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iFluor 810
|
250000
|
0.05
|
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iFluor 820
|
250000
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N/D
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iFluor 840
|
200000
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0.02
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在PBS中
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產(chǎn)品名稱
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消光系數(shù)（ε）cm-1M-1
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熒光量子產(chǎn)率（Φ）
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備注
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Alexa Fluor 488
|
73000
|
0.92
|
緩沖液（pH=7.2）
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Alexa Fluor 532
|
81000
|
0.61
|
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Alexa Fluor 546
|
112000
|
0.1
|
|
Alexa Fluor 568
|
88000
|
0.69
|
|
Alexa Fluor 594
|
92000
|
0.66
|
|
Alexa Fluor 647
|
270000
|
0.33
|
|
Alexa Fluor 660
|
132000
|
0.37
|
|
Alexa Fluor 680
|
183000
|
0.36
|
|
Alexa Fluor 700
|
205000
|
0.25
|
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Alexa Fluor 750
|
290000
|
0.12
|
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產(chǎn)品名稱
|
消光系數(shù)（ε）cm-1M-1
|
熒光量子產(chǎn)率（Φ）
|
備注
|
|
Cy3
|
150000
|
0.04
|
|
|
Cy3B
|
120000
|
0.58
|
|
|
Cy3B酸
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120000
|
0.58
|
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|
Cy5
|
250000
|
0.27(PBS)/0.4(乙醇)
|
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Fluo-4
|
82000
|
0.16
|
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Fluo-8
|
23430
|
0.16
|
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|
Cal-590
|
78000
|
0.62
|
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7-AAD
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27500
|
0.02
|
在雙鏈DNA結(jié)合的情況下
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AFC
|
17000
|
0.53
|
在乙醇中
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Hoechst 33258
|
46000
|
0.034
|
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SYTO 17
|
88000
|
0.964
|
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SYTOX綠色
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67000
|
0.53
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在DNA中
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JOJO-1
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171000
|
0.44
|
在DNA中
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