化學(xué)詞典告訴你鬼筆環(huán)肽的配置以及注意事項(xiàng)。
鬼筆環(huán)肽(phalloidin 鬼筆鵝膏素),從一種毒性菇類中分離的劇毒生物堿,C35H48N8O11S。無色,細(xì)針狀結(jié)晶,系從毒蕈類鬼筆鵝膏(Amanita phalloides)中得到的有毒的環(huán)狀七肽。
鬼筆環(huán)肽的配制
0.1mg鬼筆環(huán)肽溶于1ml無水甲醇(也可用DMSO或無水乙醇溶解)配成貯存液,可在-20度避光的條件下長(zhǎng)期保存,工作液的濃度為5ug/ml,由貯存液加生理鹽水PBS稀釋20倍即可。
染色程序:
生理鹽水PBS清洗細(xì)胞2次,每次10分鐘;
3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分鐘,生理鹽水PBS清洗細(xì)胞2次;
加入5ug/ml的FITC-鬼筆環(huán)肽室溫染色30-60分鐘,夏季時(shí)間可以短一些,生理鹽水PBS清洗細(xì)胞2次;
DAPI或hoechst33258染細(xì)胞核10分鐘,生理鹽水PBS清洗細(xì)胞2次;
吸去多余水分,加熒光封片液(中性或偏堿性緩沖液加等量甘油),蓋上蓋玻片,熒光或共聚焦顯微鏡下觀察。
鬼筆環(huán)肽注意事項(xiàng)
鬼筆環(huán)肽的分子量小,很容易通過細(xì)胞,不需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行冷丙酮和TRITON X-100處理。
藥品價(jià)格昂貴,0.1mg的售價(jià)接近兩千元,要節(jié)約使用。
毒性較大,戴上手套操作。