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鬼筆環(huán)肽的染色方法

      鬼筆環(huán)肽是*早發(fā)現(xiàn)的環(huán)狀肽之一。它是從Amanita phalloides中分離出來的,并于1937年由Feodor Lynen和Ulrich Wieland結(jié)晶。它的結(jié)構(gòu)不同尋常,因?yàn)樗粋€(gè)半胱氨酸-色氨酸鍵,形成一個(gè)雙環(huán)七肽。這種連接以前沒有被表征過,這使得鬼筆環(huán)肽的結(jié)構(gòu)闡明變得更加困難。他們使用紫外光譜法確定了硫原子的存在,并發(fā)現(xiàn)該環(huán)結(jié)構(gòu)的波長稍有偏移。雷尼鎳實(shí)驗(yàn)證實(shí)了色氨酸環(huán)中存在硫。研究人員發(fā)現(xiàn)脫硫的鬼筆環(huán)肽仍然是圓形的,這表明鬼筆環(huán)肽的結(jié)構(gòu)通常是雙環(huán)的。線性化后,Wieland和Sch?n于1955年通過“ Edman降解”闡明了脫硫鬼筆環(huán)肽的氨基酸序列。
      鬼筆環(huán)肽 (phalloidin) 是一種雙環(huán)七肽**,它能選擇性的與動(dòng)植物體內(nèi)的纖維狀的肌動(dòng)蛋白 (F-actin) 結(jié)合,這種特殊的選擇性使之成為研究細(xì)胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白微絲 (F-actin) 的有力工具。在光學(xué)顯微鏡下, 熒光標(biāo)記過的鬼筆環(huán)肽 (phalloidin-dye conjugate) 可以清晰地顯示出細(xì)胞內(nèi)微絲的形態(tài)和分布,廣泛被應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)的研究當(dāng)中。常用來標(biāo)記鬼筆環(huán)肽的熒光染料包括以下幾種:FITC, Rhodamine, TRITC or similar dyes, such as Alexa Fluor? 488 or iFluor 488.
      由于鬼筆環(huán)肽無法穿越細(xì)胞膜,所以不能直接應(yīng)用于活細(xì)胞的染色;鬼筆環(huán)肽實(shí)驗(yàn)所用的樣品在染色前需要固定,例如可以用甲醛固定和透化細(xì)胞或組織切片,此外標(biāo)記過的鬼筆環(huán)肽也可染色去石蠟后的石蠟包埋的樣品。
 
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