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技術(shù)文章

百螢問號—如何熒光標記外泌體?

外泌體——包含了復雜RNA和蛋白質(zhì)的小泡膜(直徑在40nm-100nm)

外泌體的發(fā)現(xiàn)及命名:1983年在綿羊網(wǎng)織紅細胞中發(fā)現(xiàn)外泌體,1987年被命名為”exosome”。

外泌體的組成:外泌體主要含有融合蛋白和轉(zhuǎn)運蛋白、熱休克蛋白(HSP 70)、CD類蛋白以及磷脂酶和其他脂質(zhì)相關(guān)蛋白,但是不同來源的外泌體的組成有差異。

在所有細胞中,均可以分泌外泌體,并且它還存在于體液,包括血液、尿液、腦脊液、唾液、乳汁中。

 


外泌體提取方式:

1.超速離心法:目前常用的提取方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足。

2.過濾離心法:這種操作簡便,不影響外泌體的生物活性 ,但純度不足。

3.密度梯度離心法:前期準備工作繁雜,耗時,量少,但純度高。

4.免yi磁珠法:特異性高、操作簡單保證外泌體形態(tài)完整,但會影響外泌體生物活性。

5.PS親合法:獲得的外泌體形態(tài)完整,純度高且不影響外泌體生物活性。

6.色譜法:分離的外泌體在TEM下大小均勻,但設備特殊。

外泌體鑒定方式:主要有四種方法:透射電子顯微鏡(TEM)、Nanosight、Western Blot和流式細胞術(shù)。

 

您可以使用以下任何一種親脂性熒光染料標記膜和其他疏水結(jié)構(gòu),例如外泌體:

· DiOC16(3)高氯酸鹽–大Abs / Em = 482/500 nm

· 細胞膜熒光探針DiI,高氯酸鹽–大Abs / Em = 549/563 nm

· 細胞膜熒光探針DiD,高氯酸鹽–大Abs / Em = 645/663 nm

· 細胞膜熒光探針DiR,碘化物-大Ab / Em = 754/778 nm

DiO(綠色熒光),DiI(橙色熒光),DiD(紅色熒光)和DiR(深紅色熒光)的獨特熒光顏色為多色成像和流式細胞儀分析提供了方便的工具。


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