JJ Red和JJ Green是百螢生物自主研發(fā)的核酸染料，JJ Green是一種結(jié)合于所有dsDNA雙螺旋的具有紅色/綠色激發(fā)波長(zhǎng)的染料，它是Gel Red/Green、SYBR、EB核酸染料的替代品。今天小螢為大家?guī)?lái)的是這種核酸染料的相關(guān)問題解答。
1.在使用該染料進(jìn)行凝膠電泳時(shí)，Marker分辨率低的主要原因是什么？
|
答：①Marker的加樣量：marker有一個(gè)推薦濃度范圍，選擇高的，樣品與Marker含量差別大, 也會(huì)造成條帶錯(cuò)誤（這不會(huì)是染料的問題，用EB也會(huì)存在該問題）。正確的DNA上樣量是條帶清晰的保證。Marker應(yīng)該選擇在目標(biāo)片段大小附近的梯帶較密的，這樣比對(duì)才準(zhǔn)確。另外注意的是，Marker的電泳條件也要符合DNA電泳的操作標(biāo)準(zhǔn): 如果選擇λDNA/EcoR I的酶切marker，需要預(yù)先65℃加熱5min，冰上冷卻后使用。從而避免Hind Ⅲ或EcoR I酶切造成的粘性接頭導(dǎo)致的片段連接不規(guī)則或條帶信號(hào)弱等現(xiàn)象。
②凝膠不平整：梳子不干凈有污染，加樣孔不平整也會(huì)影響圖的效果；
③電泳條件：電壓不穩(wěn)，電泳時(shí)間不超過1h。電壓過高，會(huì)導(dǎo)致小片段跑出膠，出現(xiàn)條帶缺失現(xiàn)象。
④緩沖液：TBE的緩沖能力更強(qiáng)，如果緩沖液緩沖性能下降，會(huì)導(dǎo)致DNA電泳條帶模糊，不規(guī)則遷移等。TAE建議換成TBE效果更好。另外建議配膠時(shí)的緩沖液和電泳緩沖液是同時(shí)配制。
④染色劑：JJ Red是高靈敏的DNA熒光染料，適用于各種電泳分析，操作簡(jiǎn)單：無(wú)須脫色或沖洗。至少可檢出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。JJ Red 與dsDNA 結(jié)合熒光信號(hào)會(huì)增強(qiáng)800-1000倍，用JJ Red染色的凝膠樣品熒光信號(hào)強(qiáng)，背景信號(hào)低?？蛇m用于多種電泳分析。注意觀察凝膠時(shí)應(yīng)根據(jù)染料不同，使用合適的光源和激發(fā)波長(zhǎng)，如果激發(fā)波長(zhǎng)不對(duì)，條帶會(huì)出現(xiàn)模糊等情況。
|
2.在JJ Red / JJ Green性如何？
|
答：JJ Red / JJ Green已經(jīng)被證明是替代EB、Gel、SYBR染料更為的產(chǎn)品。不過，請(qǐng)使用這些試劑時(shí)，也要遵循實(shí)驗(yàn)室條例等。
|
3.JJ Red / JJ Green的結(jié)合機(jī)制是什么？
|
答：JJ Red/ JJ Green作用原理通過靜電及電荷相互作用的結(jié)合。
|
4.JJ Red / JJ Green檢測(cè)下限是什么？
|
答：JJ Red/ JJ Green是超敏感的染料，至少可檢出20pg DNA。然而，染色的靈敏度取決于儀器的性能和曝光設(shè)置等。
|
5.可以重新融化JJ Red / JJ Green凝膠，再制備嗎？
|
答：可以，但好再添加一些染料，保證重新制備凝膠的信號(hào)強(qiáng)度。
|
6.可以提前制作JJ Red / JJ Green凝膠，儲(chǔ)存供以后使用嗎？
|
答：JJ Red和JJ Green染料是穩(wěn)定的。在保證瓊脂糖凝膠的完整性不會(huì)被破壞的前提下，你可以將預(yù)制的JJ Red / JJ Green凝膠儲(chǔ)存供以后使用。我們建議在2-8℃避光貯存凝膠。
|
7.用哪些儀器檢測(cè)JJ Red和JJ Green？
|
答：JJ Red兼容紫外透射儀和藍(lán)光透射儀，以及基于汞弧燈和氬離子激光的凝膠掃描儀。JJ Green可使用300 nm紫外透射儀檢測(cè)。
|
8.JJ Red和JJ Green可以用來(lái)染色單鏈DNA或RNA嗎？
|
答：JJ Red和JJ Green可用于單鏈DNA和RNA的染色，但JJ Red染單鏈核酸效果比JJ Green敏感5倍左右。使用熒光酶標(biāo)儀的滴定實(shí)驗(yàn)表明，JJ Red結(jié)合單鏈DNA和RNA熒光信號(hào)約是結(jié)合雙鏈DNA的一半左右。
|