9.問：Cy3酰肼可以用于哪些應(yīng)用領(lǐng)域？
答：Cyanine 3 酰肼（貨號146） 可以與含有醛基或酮基的分子反應(yīng)，形成穩(wěn)定的酰肼鍵。這種染料可以用于標(biāo)記經(jīng)過過氧化物酶氧化后的抗體和其他糖蛋白，或者標(biāo)記受到氧化應(yīng)激或脫氨作用的蛋白質(zhì)，或者標(biāo)記還原性的糖類。Cy3 NHS酯（貨號141）可以與含有氨基的分子反應(yīng)，形成穩(wěn)定的酰胺鍵。這種染料可以用于標(biāo)記多肽、蛋白質(zhì)和寡核苷酸中的氨基末端或伯胺。如果需要該類產(chǎn)品進(jìn)行蛋白/抗體染色，請根據(jù)目標(biāo)的反應(yīng)基團(tuán)和功能基團(tuán)，按
需選擇。
10.問：Cy3NHS酯標(biāo)記蛋白或抗體后，如何高效純化？
答：（1）（實(shí)驗(yàn)常用）用凝膠過濾層析法：將標(biāo)記反應(yīng)液通過大小孔徑合適的凝膠過濾柱，用適當(dāng)?shù)木彌_液洗脫，收集流出液中的Cy3-蛋白標(biāo)記物，并測定蛋白濃度和熒光強(qiáng)度。這種方法簡單快速，但可能會造成一些蛋白損失或稀釋。
（2）用逆相高效液相色譜法（RP-HPLC）：將標(biāo)記反應(yīng)液通過逆相C18柱，用不同比例的水和有機(jī)溶劑（如乙腈或甲醇）作為流動相進(jìn)行梯度洗脫，收集適當(dāng)?shù)纳珟Х?，冷凍干燥后得?/span>Cy3-蛋白標(biāo)記物。這種方法可以有效地分離和純化Cy3-蛋白標(biāo)記物，但需要專業(yè)的儀器和操作技術(shù)。
（3）用親和層析法：如果待標(biāo)記的蛋白具有特定的親和性，可以利用親和層析法進(jìn)行純化。例如，如果待標(biāo)記的蛋白是抗體，可以用蛋白A或蛋白G柱進(jìn)行純化；如果待標(biāo)記的蛋白是GST融合蛋白，可以用谷胱甘肽柱進(jìn)行純化。這種方法可以保留蛋白的活性和穩(wěn)定性，但需要特定的親和配體和緩沖液。
11.問：Cy3鏈霉親和素和Cy3NHS酯在蛋白的標(biāo)記方面有何區(qū)別？
答：Cy3鏈霉親和素（貨號16912）是一種將Cy3熒光染料與鏈霉親和素（streptavidin）結(jié)合的偶聯(lián)物，可以用于檢測生物素化的生物分子，例如抗體、配體或DNA探針。
它可以用于間接標(biāo)記法，即先用生物素化的**抗體或其他生物素化的探針與目標(biāo)蛋白結(jié)合，然后用Cy3鏈霉親和素與生物素結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號。
Cy3鏈霉親和素的操作方法取決于所使用的生物素化探針的類型和濃度，一般來說，需要先將樣品與生物素化探針孵育，然后用PBS或其他適當(dāng)?shù)木彌_液洗滌去除多余的探針，再加入適量的Cy3鏈霉親和素孵育，*后再次洗滌去除多余的偶聯(lián)物，就可以進(jìn)行熒光檢測了。
12.問：Cy3疊氮化物和炔烴有什么關(guān)系？這兩個(gè)產(chǎn)品如何標(biāo)記蛋白？
答：Cy3炔烴（貨號144）和疊氮化物（貨號143）可以在銅催化下發(fā)生[3+2]環(huán)加成反應(yīng)，生成1,4-二取代的1,2,3-三唑衍生物，這種衍生物是Cy3染料的一種形式。
這種反應(yīng)屬于點(diǎn)擊化學(xué)的范疇，因?yàn)樗歉咝?、選擇性和正交的，即它不會受到其他官能團(tuán)的干擾，也不會產(chǎn)生副產(chǎn)物。
Cy3炔烴和疊氮化物可以用來標(biāo)記蛋白的方法是，將含有Cy3炔烴的蛋白和含有疊氮化物的標(biāo)記分子（如抗體或其他配體）在銅催化下發(fā)生點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑連接，從而實(shí)現(xiàn)蛋白的熒光標(biāo)記。
這種方法的優(yōu)點(diǎn)是，它可以在溫和的條件下進(jìn)行，不會破壞蛋白的結(jié)構(gòu)和功能，而且反應(yīng)選擇性高，不會受到其他官能團(tuán)的干擾。 另外，Cy3染料是一種亮度高，熒光穩(wěn)定，對pH不敏感的橘黃色熒光染料，它可以用532 nm激光線激發(fā)，并用TRITC濾光片組觀察。
13.問：Cy3 TCO是什么？它與Cy3 NHS相比有什么區(qū)別？
答：Cy3反式環(huán)辛烯 [Cy3 TCO]（貨號900）是一種熒光染料，可以與四唑類化合物發(fā)生快速的點(diǎn)擊反應(yīng)，形成穩(wěn)定的共軛物。Cy3 TCO的優(yōu)點(diǎn)是反應(yīng)速度快，無毒，適用于多種生物體系。缺點(diǎn)是染料分子較大，可能影響標(biāo)記分子的活性或穩(wěn)定性。
Cy3反式環(huán)辛烯 [Cy3 TCO]和Cy3 NHS酯 [Cy3 NHS]是兩種不同的熒光染料，它們都可以用于標(biāo)記含有氨基的生物分子，但是它們的反應(yīng)機(jī)制和條件有所不同。Cy3 TCO是一種點(diǎn)擊化學(xué)試劑，它可以與四唑類化合物發(fā)生快速的無副產(chǎn)物的環(huán)加成反應(yīng)。這種反應(yīng)可以在水相或有機(jī)相中進(jìn)行，不受pH、溫度、緩沖液等因素的影響。Cy3 NHS酯是一種活化酯試劑，它可以與氨基形成酰胺鍵3。這種反應(yīng)需要在pH 7-9的緩沖液中進(jìn)行，且受到水解、氨基競爭等因素的影響。因此，Cy3 TCO比Cy3 NHS酯具有更高的反應(yīng)效率和選擇性，更適合標(biāo)記活性或穩(wěn)定性較低的生物分子。所以如果需要標(biāo)記含氨基的生物分子，選擇不止Cy3NHS酯，Cy3 TCO也許是您實(shí)驗(yàn)的更優(yōu)良選擇，考慮自己的實(shí)驗(yàn)條件，選擇*佳產(chǎn)品，可以事半功倍。
14問：Cy3四嗪是什么？它與其他常見的Cy3染料有何不同？
答：Cy3 tetrazine（貨號910）和其他Cy3染料的主要區(qū)別在于它們的反應(yīng)基團(tuán)和反應(yīng)方式。Cy3 tetrazine是一種帶有四唑基團(tuán)的熒光探針，它可以與TCO（反式-環(huán)辛烯）或其他應(yīng)力烯烴發(fā)生特異性的點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的生物結(jié)合物。這種反應(yīng)具有快速、高效、無毒和無銅的優(yōu)點(diǎn)。
15.問：PE-Cy5 Tandem和普通的Cy5染料相比，有什么優(yōu)勢？
答：（1）PE-Cy5 Tandem（貨號2610）與FITC、PE在光譜上重疊范圍小，熒光干擾少，因此實(shí)驗(yàn)中常將PE-Cy5 Tandem與FITC、PE搭配使用。普通的Cy5染料與單核細(xì)胞和粒細(xì)胞的非特異性結(jié)合多，實(shí)驗(yàn)結(jié)果容易出現(xiàn)假陽性。
（2）PE-Cy5 Tandem具有較高的熒光強(qiáng)度和穩(wěn)定性，可用于標(biāo)記表達(dá)水平較低的蛋白。普通的Cy5染料的熒光強(qiáng)度和穩(wěn)定性較低，適用于標(biāo)記表達(dá)水平較高的蛋白。
（3）二者的染色步驟類似，主要根據(jù)蛋白的表達(dá)水平選擇適合自己實(shí)驗(yàn)的產(chǎn)品。
16問：Cy5DIGE NHS酯是什么？它和Cy5NHS酯有什么區(qū)別？
答：Cy5DIGE NHS ester（貨號25306）是一種專門用于差異凝膠電泳（DIGE）分析的染料，它可以與C2DIGE和/或C3DIGE一起使用，來比較兩個(gè)或三個(gè)樣品中的蛋白質(zhì)表達(dá)。Cy5DIGE NHS ester具有**的遷移匹配和高分辨率的蛋白質(zhì)檢測能力。Cy5NHS則是一種更通用的染料，它可以用于標(biāo)記核酸分子（DNA和RNA）以及其他生物分子。